Otimização de protocolos para detecção molecular de viroses em inhame

Abstract

A presença de sintomas de viroses é frequente nos plantios de inhame do Nordeste e constitui-se um dos fatores limitantes de produção. Já foram relatados na cultura vírus dos gêneros Potyvirus, Badnavirus, Potexvirus, Maculavirus, Comovirus e Cucumovirus. Destacam-se pela importância e distribuição geográfica, espécies dos gêneros Potyvirus e Badnavirus. O objetivo deste trabalho foi otimizar e tornar reprodutível protocolos para a detecção molecular de espécies dos gêneros Potyvirus e Badnavirus em inhame. Foram coletadas túberas de 40 plantas com e sem sintomas de viroses nos municípios de São Felipe, Maragojipe, São Félix e Cruz das Almas. Para a detecção de Badnavirus  o DNA total foi extraído com base no protocolo de Kamal Sharma (2009) com modificações na quantidade de material vegetal processado, nas centrifugações, na concentração do DNA e na temperatura de anelamento na PCR. Enquanto para Potyvirus (Yam mosaic virus,YMV e Yam mild mosaic virus,YMMV), o RNA foi extraído testando as seguintes metodologias: Kit de Extração de RNA Total Axygen, Easyzol e protocolo de Gambino (2008), com modificações semelhantes às avaliadas no protocolo de extração de DNA. Para Badnavirus detectou-se uma banda de 580 pares de bases (pb). Na detecção de Potyvirus, obteve-se um fragmento de 586 pb com os primers para o YMV. O YMMV não foi detectado em nenhuma das amostras analisadas. Contudo, os protocolos que apresentaram melhores respostas para extração de DNA e RNA foram Kamal Sharma (2009) e Gambino (2008), respectivamente. Os fragmentos genômicos obtidos foram sequenciados, apresentando alta homologia com Badnavirus e YMV.